ELISA試劑盒檢測(cè)中用到的樣品處理方法
瀏覽次數(shù):6536發(fā)布日期:2013-08-21
hbzhan內(nèi)容導(dǎo)讀:試劑盒使用時(shí)一定要根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)需要購(gòu)買(mǎi)提取試劑盒,如果不是試劑盒,或許能提出RNA,但不能確保其質(zhì)量以及完整性,會(huì)影響RT-PCR、Northernblot、Dotblot、RealtimeRTPCR、芯片分析、polyA篩選、體外翻譯、RNase保護(hù)分析、分子克隆等后續(xù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。
1.細(xì)胞培養(yǎng)物上清:
細(xì)胞培養(yǎng)物于室溫1000g,離心10分鐘后收集上清,并將標(biāo)本保存于-20℃,且應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2.血清:
標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜后與1000g,4℃離心20分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)?biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3.血漿:
可用EDTA或肝素作為抗凝劑標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2-8℃,1000g離心15分鐘,或?qū)?biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
4.尿液:
無(wú)菌收集取初尿,離心除去沉淀物,既可用于檢測(cè),要長(zhǎng)期保存尿樣,可以加入0.05%的NaN3在4-8℃保存,或加入尿樣冰凍保護(hù)液放入-20℃冰箱長(zhǎng)期保存。
5.組織勻漿:
將組織標(biāo)本先用PBS洗滌,除去多余血液,勻漿化后放在PBS于-20℃放置過(guò)夜,再經(jīng)過(guò)二次反復(fù)凍融破膜,5000g,4℃離心5分鐘,取上清即可檢測(cè)。
當(dāng)前提取效果好的是QIANGEN公司生產(chǎn)的RNA提取
試劑盒,但其售價(jià)較高,單次實(shí)驗(yàn)費(fèi)用話費(fèi)太大,對(duì)精度要求不高的實(shí)驗(yàn)沒(méi)有必要購(gòu)買(mǎi),當(dāng)然還有其它的進(jìn)口試劑盒,但是均存在價(jià)格高、訂貨周期長(zhǎng)的問(wèn)題(如果碰上國(guó)內(nèi)無(wú)貨的時(shí)候,要從國(guó)外發(fā)貨,會(huì)等很長(zhǎng)一段時(shí)間)。普通的提取實(shí)驗(yàn)用國(guó)產(chǎn)的試劑盒就足以,價(jià)格不高,基本上各地均有現(xiàn)貨,如天根(目前國(guó)內(nèi)生產(chǎn)的試劑盒中銷售面比較廣的一種)等,其價(jià)格比進(jìn)口試劑盒要便宜許多,且效果還不錯(cuò),性價(jià)比還可以。
當(dāng)然,就RNA的提取而言,不一定
試劑盒的提取效果就非常好,其實(shí)采用一些經(jīng)典的RNA提取方法,效果也很不錯(cuò),如:TRIZOL、EDTA等,只是試劑盒使用方便,經(jīng)典的方法操作復(fù)雜一些。